目的
1.學(xué)習(xí)微生物涂片和染色的基本技術(shù),掌握細菌簡單染色法;
2.學(xué)習(xí)無菌操作,并鞏固顯微鏡的使用方法;
3.學(xué)習(xí)在油鏡下觀察細菌的個體形態(tài)。
原理
由于細菌體積小、菌體透明,活體細胞內(nèi)含有大量水分,且對光線的吸收和反射與周圍背景沒有顯著的明暗差,因而很難在普通光學(xué)顯微鏡下觀察它們的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。只有經(jīng)過染色,借助顏色的反襯作用才可看清菌體形態(tài)以及菌體表面結(jié)構(gòu)。染色技術(shù)是觀察微生物形態(tài)結(jié)構(gòu)的重要手段。
能夠使微生物著色的化合物被稱為染色劑,染色劑一般都是成鹽化合物。目前普遍采用的微生物染色劑多為苯的衍生物,其化學(xué)結(jié)構(gòu)中除含有苯環(huán)外,還連接有發(fā)色團和助色團。發(fā)色團可使化合物顯色,而助色團則能增加色度,并因具有電離特性,可與菌體細胞相結(jié)合,從而使其著色。
細菌的簡單染色,即只利用一種染色劑使菌體著色。此法操作簡單,適用于細菌形態(tài)的觀察。通常細菌的簡單染色也采用堿性染色劑,如結(jié)晶紫或堿性品紅等,堿性染料不是堿而是一種鹽,電離時染料離子通常帶正電荷。而在中性、堿性或弱酸性的溶液中,細菌細胞通常帶有負(fù)電荷,這樣帶正電荷的染料離子就容易與帶負(fù)電荷的菌體細胞相結(jié)合并使其著色。染色后便于觀察細菌的形態(tài)、大小和排列方式等特征。
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